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双光子激发原理
在高光子密度情况下,荧光分子可以同时吸收2个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。
双光子激发在生物成像中的优势
激发波长为长波长,有更好的组织穿透性,适用于厚组织样本观察
更好的光学层析能力,更高的轴向分辨率
光毒性,光漂白性小,可用于长时程成像研究
高荧光收集效率,高分辨率成像
适用于活体组织细胞成像研究
FIRM-TPM实现自由行为学动物高速高分辨成像
使用能够传导 920 nm飞秒激光脉冲的光纤,实现飞秒激光无畸变传导,可对神经生物学研究常用的探针GFP和GCaMP进行成像
使用新型超软光纤束,高效收集荧光,且不影响小鼠自由活动,提高成像稳定性
使用微机电扫描振镜进行高速扫描,实现512×512像素下,9HZ的高速双光子成像;使用细软的振镜电缆给微机电提供扫描电压,在保证良好抗干扰的条件下,尽量减轻模块重量
使用高数值孔径的微型物镜,实现亚细胞水平分辨率成像
整体机械性能稳定,即使动物剧烈运动,整个系统依然可以保持稳定,不影响成像质量
体积小,重量轻和可拔插的探头设计适用于复杂的行为学实验,且可长时间地对自由活动的动物进行细胞结构和功能的观察